Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展加速的过程中逐渐扩展

从第一次注意到胰岛自身免疫到注意到1型号肝炎医学腹泻的十分困难数万人在孩童时期就有很好的描绘借助于，多个胰岛自身免疫阳性的孩童里有70%在胰岛素转换成后10年内患上肝炎，而随访15年的孩童这一%-减小到84%。相比之下之下，占多数医学1型号肝炎一半以上的型号1型号肝炎的中风有助于还没有人给予确实的研究。

愈发多的人开始常用分期系统对来定义1型号肝炎的十分困难：个体在注意到多种胰岛自身免疫时重回第1阶段，注意到血糖异常时重回第2阶段，注意到腹泻时重回第3阶段。一些多发胰岛自身免疫阳性的个体，在1期和2期，十分困难较快，并发展为中风的1型号肝炎。我们之前描绘借助于了各别在首次侦测到多种胰岛自身免疫取样后有数10年无肝炎的极快十分困难者，这组成员病人人数少，但不同之处极其明确。随后，我们发现胰岛自身蛋白质特异性CD8+T蛋白质反应在十分困难比较快的病人里基本不假定，但在近期中风和长期假定的肝炎病人里很很难侦测到。这可能断定，与十分困难病人相比之下，这些病人自身免疫反应的调节增强。

早期研究断定，尽管调节性T蛋白质(Treg)数量正常，但肝炎病人假定一些功能缺陷，其里包括对IL-2的反应并能降低。此外，肝炎病人里的现像CD4+T蛋白质可能对调节更具抵抗性，表现为现像T蛋白质的依赖性减弱，其本质产生的Treg和体外产生的诱发Treg，以及蛋白质经历的CD4+T蛋白质里IL-2反应减弱。本研究的目的是描绘借助于了CD4+调节性T蛋白质(Treg)在一小群极比较快十分困难者里的不同之处，他们的平均成年人为43岁(31-72岁)，随访时间段为18-32年。

方法：BOX研究是一项以人群为基础的纵向研究，在21岁以下确诊的病人亲属里检查1型号肝炎的有可能因素。我们之前描绘借助于了长期比较快十分困难者的不同之处，他们保持良好多重胰岛自身免疫阳性超过10年，但没有人注意到肝炎的医学腹泻，快性或非来受累自身免疫。随后，10名继续保持良好无肝炎并希望提供大量血液取样的比较快十分困难者纳入T和B蛋白质功能比对。在目前的研究里，8名快十分困难者(SP组成员)，里位成年人43岁(31-72岁)，18 - 32岁密切关系的胰岛自身免疫阳性。所有的行动者都保持稳定1型号肝炎十分困难的1期，尽管一些人随后失去了胰岛自身免疫对某些蛋白质的过敏原，然而，一名病人已经保持稳定2期有数6年，但没有人注意到医学腹泻，一名病人被临床为肝炎，该受试者72岁，在采集实验取样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据比对里对该NADP来进行了除此以外评估。分离外周血单个核蛋白质(PBMCs)，换用多参数流式蛋白质法术和T蛋白质依赖性试验评估NADP里Treg的振幅、表型号和功能。常用FlowSOM和CITRUS(聚类断定、表征和复归)来进行无都由聚类比对，评估Treg表型号。

结果：与保健NADP相比之下，来自快十分困难体的遗忘CD4+T蛋白质的都由聚类推断，抑制的遗忘CD4+ Treg振幅减小，与抑制作用诱发的TNFR相关蛋白(GITR)解读减小有关。一名HbA1c升高的病人与十分困难比较快者和最简单的对照组成员相比之下，Treg谱大致相同。功能比对断定，与保健NADP相比之下，来自比较快十分困难体的Treg抑制的CD4+现像T蛋白质依赖性引人注意受损。表现为对现像CD4+T蛋白质CD25和CD134解读的依赖性减小。

绘借助于1 深入的表型号比对推断，CD4+Treg亚型号在快十分困难路由表里减小。由FlowSOM生成的Treg室，组成员织起来在来自所有NADP的来时CD4+CD45RA -蛋白质上。根据标上物解读断定借助于10个元簇:遗忘T蛋白质_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T蛋白质;HLA-DR + GITR +遗忘T蛋白质;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)常用9个不同Treg标上生成的10个元簇的MST。每个终端代表一个集群(100个集群)，很大的元集群(10个元集群)在终端组成员周围手工。每个终端里的饼绘借助于暗示单个标上的解读级别。(b)每个元聚类的热绘借助于，以推断全面性标上解读。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)生成绘借助于，以及FlowSOM鉴别的每个元簇的裂口。(e-l)相对稀土元素为每个metacluster木箱曲线或绘借助于(稀土元素> 0.05%)确切为HD和SP组成员:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T蛋白质(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T蛋白质(l)。绿色边框代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对小写字母秩检验。此键适用于绘借助于形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘借助于2 常用CITRUS的预测模型号证实，Treg振幅的减小是十分困难比较快的标志。分级旁路(a - f)和柑橘比对(g-k)比较SP行动者和最简单的HD行动者在CD4+CD45RA−T蛋白质上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的代表性绘借助于。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读来进行分离，模拟FlowSOM群体。(b) HD(白斑)和SP(黑纹)组成员以及NADPSP 606(绿色)里CD25+ cd127的振幅汇总绘借助于。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+旁路兄集的木箱曲线或绘借助于;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)棉花簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读强度渐变，箭头突借助于的簇被鉴别为SP和HD路由表密切关系的不同。(j)木箱曲线或绘借助于推断了在SP(黑纹)和HD(灰点)组成员里，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的相对稀土元素(%-)。(k)直方绘借助于推断每个簇的表型号(粉红色)和Treg标上相对解读与背景解读(紫色);上列，存储器Treg_3;下面即刻，存储器Treg_4。背景与所有其他簇里标上的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对小写字母秩检验

绘借助于3 与保健献血者相比之下，十分困难比较快者遗忘treg的GITR减小。每个遗忘CD4+T蛋白质元簇(遗忘T蛋白质_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T蛋白质;HLA-DR + GITR +遗忘T蛋白质;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个解读标上的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的解读热绘借助于(sp606不包括在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇里所有HD(黄褐色)、所有SP(紫色)和SP 606(绿色)的FlowSOM GITR解读串联，推断直方绘借助于(c)和汇总绘借助于(d)。Wilcoxon配对小写字母秩和检验，p< 0.07(绿色)所有NADP包括，p< 0.05(紫色)NADPSP 606和最简单的HD不包括在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR解读，从分级旁路，从所有HD(黄褐色)、所有SP(紫色)和SP 606(绿色)串联，推断直方绘借助于(e)和汇总绘借助于(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对小写字母秩检验

绘借助于4 来自比较快十分困难的CD4+ treg蛋白质支配现像CD4+T蛋白质的并能降低。SP组成员用紫色的线或和边框暗示，HD组成员用黑色的线或和边框暗示，绿色的线或/边框暗示NADPsp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质来进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标上为CFSE, Treg按观察的%-氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠来时化蛋白质，人才3在此之后来进行流式蛋白质法术侦测。(a-d)与CD4+需要的话者相对应的treg人才(暂时性)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者人才。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE依赖性比数万人(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性比数万人。常用阳性对照(抑制的响应蛋白质不含treg)计算依赖性比数万人。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

绘借助于5 现像CD4+T蛋白质对比较快十分困难的T蛋白质来时化的依赖性更敏感。SP组成员用紫色的线或和边框暗示，HD组成员用黑色的线或和边框暗示，绿色的线或/边框暗示NADPsp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质来进行分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标上，treg按观察的%-氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠来时化蛋白质，人才3在此之后来进行流式蛋白质法术(CD25反染)和蛋白质因兄比对。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者共同人才。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE依赖性百分比(b)。(c,d) CD25依赖性百分比(c)和CD134依赖性百分比(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才里的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

事实：我们推论的事实是，来自比较快十分困难兄的来时化遗忘CD4+Treg在GITR解读里给予了适配和独特，强调了进一步研究Treg在1型号肝炎风险个体里的差异性的必要。

原文借助于处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28